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曲线绘制的使用工具 以下所述中使用的曲线绘制软件为Curve E xpert1.4, 各位老师们如有需要即可点击此链接下载自行下载使用; 标准曲线的绘制 可以采用各种绘图软件来绘制 ELISA 标准曲线,下面以“Curve Expert1.4”软件为例,绘制 ELISA 标准曲线的方法如下; 1.启动“Curve Expert” 2.X 轴输入标准品的 OD 值(双抗夹心输入 OD-空白值),Y 轴输入所对应的浓度值
实验动物采血 在实验研究中,经常会采集实验动物血液用于分析和评估动物体内的生理和病理情况。根据不同的实验设计和要求及动物的特性和生理差异,选择合适的采血方法,可以减少动物伤害,提高实验的成功率和结果的可靠性。今天小编给大家普及下实验动物采血方法及采血管的选择。 01 大鼠、小鼠采血方法 尾尖采血(剪尾采血) 采血方法:动物麻醉后并固定,将鼠尾在45-50℃温水中浸泡数分钟,也可用二甲苯等化学药物涂擦,使局新血管扩张。擦干尾部,用酒
免疫印迹(Western Blot)在研究蛋白相关实验中是关键技术,由于实验周期较长、步骤繁琐,影响因素较多,在实验过程中经常会遇到各种难题。我们需要追根求源,查找并修复问题。今天我们讲解下WB实验中内参的选择。 什么是内参及内参的作用 内参即是内部参照(Internal control),是指在组织和细胞中表达相对稳定的一类蛋白质,通常由管家基因编码。这些蛋白质被用作检测蛋白表达水平变化时的参照物,以确定实验的准确性和可重复性。 在Western Blot实验中,我们使用内参其实就是使用与内参对应的抗体来检测内参的
细胞培养上清 ①将细胞培养上清液吸入离心管中,在2-8℃下以1000×g离心20分钟,除去细胞碎片和杂质,收集上清液备用, ②样本保存在-20℃或-80℃,避免反复冻融。 01 uniprot Q:那什么情况下需要测细胞裂解液,什么情况下是检测细胞培养液上清呢? A:首先从细胞培养的形态(贴壁细胞、悬浮细胞)所检测蛋白分泌表达位置: 在uniprot蛋白数据库中Subcellular Location 栏
Trizol 法抽提待检测细胞的RNA(推荐使用 TRIpure总RNA提取试剂 货号:EP013),反转录为CDNA 后裔支原体 检测引物PCR 检测细胞支原体污染情况。 支原体检测引物 Mycoplasma_F01 GGG AGC AAA CAG GAT TAG TAT CCC T Mycoplasma_R01 TGC ACC ATC TGT CAC TCT GTT AAC CTC 40 cycles,63
一、Uniprot蛋白数据库介绍及使用详解 Uniprot数据库是资源最广、信息最丰富的蛋白质数据库,是查询蛋白功能的首选数据库。Uniprot数据库由Swiss-Prot、TrEMBL和PIR-PSD三大子数据库构成,数据主要来自于各物种基因组测序完成后得到的全基因蛋白质序列,并包含了很多来自文献中的蛋白及其功能信息。尤其是swiss-prot 子数据库,库中蛋白质信息都是手工核对过的 ,非冗余, 有详细注释信息的蛋白数据。作为一名科研工作者,Uniprot数据库的使用技能应该是必备的技能之一。 (1)UniProtKB(UniProt Knowledgebase)是蛋白质序列、
1、样本RNA得率以及各类项目最低起始量 各样本Total RNA得率统计(仅供参考): 测序项目推荐起始量(起始量仅供参考,外泌体不允许18s/28s rRNA有峰): 表达谱芯片及小RNA测序体液样本及外泌体项目起始量(仅供参考) 2、各类样本准备指南 2.1 动物组织/临床组织采集 ① 取新鲜组织,组织体积要小,尽量长宽高≤0.5cm,考虑到可操作性,所切组织块的大小可参考绿豆颗粒的大小 ② 去除非研究的组织类型(如结缔组织,脂肪组织等),如果是临床病变组织的取材要正确判断病变以及正常组织,应将病变组织
一、原理:免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。 目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结
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