什么是ELISA--原理与分类

一、基本原理 1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。 这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗

2022-05-23

内参抗体怎么选

内参抗体可用于评价蛋白质免疫印迹法(Western Blot)的效率，比较凝胶中每孔的蛋白上样量。此类对照可帮助确定样品间表达水平的差异，以判断是由细胞裂解物的实际蛋白水平导致，还是由上样量的差异导致。 内参抗体主要功能 （1）检测整个WB流程是否正常 （2）检测基因表达产物是否正确 （3）比较产物微量的相对变化 （4）评价各个上样孔内蛋白的总量是否基本一致 图一示例 内参抗体在目标蛋白的免疫荧光研究中，也可以作为共染的阳性对照。内参抗体分为未标记型和标记型，标记物包括生物素、HRP、FITC、PE、Cy染料和Alexa Fluor染料。

2022-05-11

ELK Biotechnology归纳Elisa实验中样本的制备与保存

样品收集注意事项 1.   样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装 （ELK Biotechnology单指标夹心法试剂盒，单孔标准上样量为100μl ），冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃(3个月内检测)，避免反复冻融。融化样本在试验前请再次离心以去除冻融后可能出现的沉淀物。 2.   试剂盒检测范围不等同于样本的浓度范围，如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议查阅文献后先做预实验，以确定稀释倍数)。 3.   若所检样本不在说明书所列样本之中，建议做预实验验证其检测有效性。

2022-05-04

通过两种软件计算ELISA结果

方法一：使用Curve  Expert1.4软件（点击下载Curve  Expert1.4） 标准曲线的绘制  可以采用各种绘图软件来绘制ELISA标准曲线，下面以“Curve  Expert1.4”软件为例，绘制ELISA标准曲线的方法如下； 1．启动“Curve  Expert” 2．X轴输入标准品的OD值（双抗夹心输入OD-空白值），Y轴输入所对应的浓度值，如图： 3．单击[运行]  按钮，出现如下对话框 4．单击[ok

2022-05-04

ELISA实验操作视频

2022-04-26

Westernblot实验蛋白提取

贴壁细胞总蛋白提取： 用TBS缓冲液润洗贴壁细胞2-3次，最后一次尽量吸干残留液。加入适当体积的细胞总蛋白提取试剂(使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂)于培养板/瓶内裂解3-5min。期间反复晃动培养板/瓶，使试剂与细胞充分接触。用细胞刮刀将细胞及试剂刮下，收集到1.5mL离心管中。冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。4℃13000g离心5min，收集上清，即为总蛋白溶液。 悬浮细胞总蛋白提取： 低速离心收集细胞，加入适当体积的冷却的PBS缓冲液重悬，2000rpm离心10min，吸除上清。重复以上操作两次，收集细胞沉淀。加入适当体积的细胞总蛋白提取试剂(使用

2021-08-14

引物干粉使用说明

(1)引物干粉开盖前13000rpm，室温离心1min。 (2)加入管壁上10倍nmole数值的水(μL)的DEPC水，涡旋混匀，瞬时离心。此为引物储备液(100μM)，用后于-20℃保存。 *引物管上一般是3.0~6.0nmole，加入十倍这个数值微升的水(30~60μL)。 (3)取一新1.5mL EP管，加入380μLDEPC水，上下游引物储备液各吸取10μL于新EP管中，涡旋混匀，瞬时离心。此为引物工作液(2.5μM)，可直接用于实验，用后于4℃保存。

2021-08-14