结果描述

可能的原因

建议及预防措施

终止后,整板结果显现均一的黄色或淡色;或标曲有线性但背景过高

整版发黄现象可能由于错加其他试剂造成

实验前检查试剂的组分及批号,确认所有组分均属于对应的试剂盒.不同试剂盒或不同批号

未充分清洗酶标板

确保清洗过程中每个微孔所加入洗涤液量一致.清洗完成后,将酶标板用力按压在吸水纸上,以除去残余的缓冲液.

孵育时间过长

请严格按照说明书步骤操作

酶标记物污染了吸头及盛放显色剂容器或阳性对照污染了微孔

吸取不同的试剂时应更换吸头,配置不同的试剂组分时,应使用不同的储存器皿,操作时请使用移液器

检测抗体货Avidin-HRP的浓度过高

检查浓度计算是否正确或进一步稀释后再使用

底物在使用前曝光或污染

加入底物前,应始终避光保存

显色时间过长

请严格按照说明书步骤操作

读取了吸光值时使用了错误的滤光片

TMB为底物时应在450nm波长读取吸光值,并以650nm作为校正波长

结果描述

可能的原因

建议及预防措施

显色步骤结束后,酶标板所有孔均无颜色;阳性对照不明显

组分试剂混淆使用

配制或使用时应看清楚标签

洗版及加样过程中,酶标物受污染失活失去催化显色剂显色的能力

确认盛酶标的容器不含酶抑制剂(如NaN3等),确认配制洗液的容器已洗干净.

遗漏了某种试剂或某个步骤

详细审阅说明书,并严格遵循操作步骤

结果描述

可能的原因

建议及预防措施

包括标曲、样本在内的所有板孔颜色均较淡

试剂盒超过有效期或储存不当

请在有效期内使用,并按照说明书推荐的保存条件保存,避免污染

试剂、样品用前未平衡

所有试剂、样品应置室温平衡30min左右

移液器吸量不足,移液抽吸排放太快,吸头内壁挂液太多或内壁不清洁

校正移液器,吸头要配套,每次吸头要吻合紧密,移液不宜过快,排放应完全.吸头内壁要清洁,最好一次性使用.

孵育反应时间不足

定时器准确定时

显色反应不足

一般在15-30min

洗涤次数增加,浓缩洗液稀释倍数不符合要求

减少洗涤冲击力,按照说明书要求稀释浓缩洗液、洗涤时间,准确记录洗涤次数及用量

蒸馏水水质有问题

配置好的洗液一定要检测PH值是否呈中性

洗板及加样过程中,酶标物受污染失活而失去催化显色剂显色的能力

确认盛酶标的容器不含酶抑制剂(如NaN3等),确认配制洗液的容器已经洗干净,确认配置洗液的纯化水达到要求且未受污染.

标曲正常,样本显色较淡

样本使用NaN3防腐剂,抑制了酶的反应

样本不可使用NaN3

待测样本中可能不含强阳性标本,故结果可能是正常的

如有怀疑,可以复检

目测结果正常,但酶标仪读值偏低

读取吸光值时使用了错误的滤光片

TMB为底物时应在450nm波长读取吸光值,并以650nm作为校正波长

结果描述

可能的原因

建议及预防措施

重复性差

标准品配制有误

严格按照说明书标准品配制进行操作,仅使用推荐的稀释液对标准品进行稀释

试剂盒储存方法不当或储存环境太差

请在说明书推荐的条件下保存,不要将重悬后的组分在室温放置时间过长

过早稀释各工作组分

各工作组分请在使用前10分钟配置,并立即加入到微孔中

样本加入后未混匀

针对同时加入多种试剂组分,加样后在混匀器上充分混匀,注意稳拿稳放,防止外溅

酶标仪测定重复性差

校准酶标仪

孵育时间、洗涤条件、显色条件、操作人员不一致

重复测定标本,反应条件、人员等尽可能与上次保持一致

洗涤不正确

移液器准确加入200µl/孔洗涤液或注满各孔,但不要溢出.洗板机洗板时不应有堵孔,洗涤应充分

孵育温度恒温效果不好

保持温度恒定,避免局部温度过高过低

加液时,过多残留于孔壁上

加液时,吸头在不碰到孔底的前提下尽量沿着孔壁下方加液

耗材重复使用

吸取不同的试剂时应更换吸头,配置不同的试剂组分时,应使用不同的储液器皿

微孔底部被划伤或者存在污垢

操作时细心,注意不要触碰底部擦拭酶标板底部,以去除污垢或者指纹

阈值附近时阴时阳

同一样品做3个复孔,以2个(含2个以上相同结果为准)

加样时交叉污染

加标本时尽量避免交叉污染

出现随机性的花板、跳孔现象

手工洗板造成的交叉污染

手工洗板时前3次注洗液后应立即弃去,后几次再设定浸泡时间,可以减少交叉污染

拍板时交叉污染

拍板时用合适的吸水纸巾,不要把无关物质拍进板孔,并尽量不要在同一位置拍,以免交叉污染

洗板机加液头堵塞导致加液不满或吸液残留量较大,造成花板、跳孔

疏通加液头,使洗板时每孔均注满洗液,吸液时残留量要小

样本离心处理不全,致使反应孔内发生凝血现象或存在沉淀物或残留细胞成分干扰

血清血浆应充分离心,3000rpm 6min以上

样品放置时间过长,污染

样品应保持新鲜,或低温保存,防止污染

洗涤液配制有误或直接误用浓缩洗涤液

请按说明书配置